R recuperação

1. Remova o tubo congelado do nitrogênio líquido e imediatamente em banho-maria a 37 ℃, agitando levemente. Depois que o líquido derreter (cerca de 1 a 1,5 minutos), retire um pouco do álcool e coloque-o na mesa de trabalho ultralimpa.

2. Levar a suspensão de células para um tubo de centrífuga de 15ml com 10ml de meio (lavar o tubo congelado com o meio e lavar todas as células grudadas na parede) e centrifugar a 1000 por 5 minutos.

3. O sobrenadante foi invertido e 1ml do meio foi adicionado para suspender as células. Fume em um prato de 10 cm com 10 ml de meio e agite suavemente para a esquerda e para a direita para distribuir uniformemente as células no prato.

4. Marque o tipo de célula e a data, o nome humano, e assim por diante, coloque na incubadora de CO2, cole as células e troque o meio.

5. O meio foi trocado uma vez a cada 3 dias.

P sage

1. As plantas foram passadas para atingir 80-90% de cobertura.

2. Abup o meio original .

3. Adicione a tripsina apropriada (basta cobrir as células) e digerir por 1-2 minutos .

4. A digestão foi terminada pela adição de um volume igual do meio contendo soro .

5. Sopre as células com uma pistola de pipeta e deixe-as todas suspensas.

6. As células foram aspiradas para um tubo de centrífuga de 15 ml e centrifugadas a 1000 durante 5 min.

7. Despeje o sobrenadante e adicione 1-2ml de meio para explodir todas as células.

8. As células foram passadas para vários pratos de cultura, dependendo da espécie celular. Geralmente, as células cancerígenas são divididas em 5 células e três células normais são transmitidas. Continue a cultivar.

Livre para digerir as células e centrifugá-las (ibid. acima).

Suspenda as células com a solução de armazenamento congelada correspondente, divida-as em um tubo de freezer esterilizado, descanse por alguns minutos e especifique o tipo de célula e a data de armazenamento congelado. 4℃ 30min, -20℃ 30min, -80℃ durante a noite e então armazenado em perfusão de nitrogênio líquido.

Preparação da solução de criopreservação: 70% meio 20% FBS 10% DMSO. O DMSO deve ser adicionado lentamente e agitado constantemente.