Como material auxiliar em experimentos de detecção de ELISA, uma enzima placa desempenha um papel decisivo e afeta diretamente os resultados experimentais finais. A qualidade do placa de enzima depende principalmente de sua sensibilidade à adsorção de proteínas, da diferença na capacidade de adsorção de proteínas entre placas e orifícios e da diferença entre lotes do produto adquirido placa de enzima . Portanto, selecionar um placa de enzima produto com alta sensibilidade de adsorção de proteínas, a pequena diferença entre os orifícios da capacidade de adsorção de proteínas e uma pequena diferença entre os lotes é a garantia para o experimentador obter resultados experimentais confiáveis ​​e estáveis.

placa de enzima classificação: de acordo com diferentes padrões de classificação, a placa tem classificações diferentes.

1: De acordo com o número de furos, pode ser dividido em 96 furos, 48 ​​furos, etc. placa de enzima é usado principalmente com o leitor de microplacas, o placa medidor no mercado é de no máximo 96 furos, então a microplaca é de 96 furos.

2: De acordo com os diferentes fundos, é dividido em fundo plano, fundo em U, fundo em V, etc.

O índice de refração da base plana é baixo, o que é adequado para detecção na microplaca;

T O índice de refração da microplaca U é alto, conveniente para amostragem, amostragem e mistura, e pode observar diretamente a mudança de cor sem colocá-la na microplaca, de modo a determinar se há uma reação imune correspondente.

A microplaca da base V pode absorver a amostra com precisão.

3: De acordo com as diferentes habilidades de ligação da microplaca e proteína e outras moléculas, ela é dividida em alta força de ligação, força de ligação média e aminação.

(1) Alta força de ligação

Após a superfície desta microplaca, sua capacidade de ligação à proteína é bastante aumentada, até 300 ~ 400 ng IgG / cm2, e o peso molecular da proteína ligada principal é> 10 kD. O uso desta classe de microplaca pode melhorar a sensibilidade e pode reduzir relativamente a concentração e a quantidade de proteína revestida, o que é mais fácil de produzir reações inespecíficas. Após o revestimento com antígeno ou anticorpo, o detergente não iônico não pode selar efetivamente o local da proteína não ligada, e a proteína deve ser usada como agente selante.

(2) Força de ligação média

Tais placas de microplacas ligam-se passivamente à proteína através de ligações hidrofóbicas na superfície, e são adequadas como carreadores de fase sólida para proteínas macromoleculares com peso molecular > 20 kD, com capacidade de ligação de proteínas de 200 a 300 ng IgG/cm2. Devido às características de sua ligação apenas a macromoléculas, é adequado para portadores de fase sólida como anticorpos ou antígenos não purificados para reduzir o potencial de reatividade cruzada não específica. A placa pode ser uma proteína inerte ou um detergente não iônico como solução de vedação.

(3) Aminação

Esta microplaca após uma modificação de superfície possui um grupo amino carregado positivamente, cuja ligação hidrofóbica é substituída por uma ligação hidrofílica. Esta classe de microplaca é adequada como portadora de fase sólida para proteínas de moléculas pequenas. Usando um tampão e pH adequados, a superfície se liga a pequenas moléculas carregadas negativamente por meio de ligações iônicas. Devido às propriedades hidrófilas da sua superfície e à sua capacidade de se ligar covalentemente a outros reticuladores, pode ser utilizada para fixar moléculas de proteínas solúveis em agentes de descontaminação como Triton-100, Tween 20, etc. O defeito desta placa é devido à hidrofobicidade reduzida; além disso, a superfície precisa ser efetivamente fechada. Devido às propriedades de superfície hidrofílica e covalente, a solução de vedação usada deve ser capaz de interagir com qualquer grupo funcional no grupo amino não reativo e o reticulador selecionado.

4. De acordo com a cor pode ser dividido em transparente, preto e branco.

Transparente é o mais comumente usado para os experimentos mais gerais de imunização ligada a enzima. Em contraste com a microplaca transparente, existem também microplacas opacas para detecção luminosa, geralmente preto e branco. A microplaca preta em si tem absorção de luz, então seu sinal é muito menor do que a microplaca branca, então geralmente é usada para detectar luz forte, como detecção de fluorescência. A microplaca branca é usada para detecção de luz fraca, frequentemente usada para quimioluminescência geral. Além disso, a microplaca preta também pode atenuar o problema de reações inespecíficas. Ao mesmo tempo, é importante observar que com a microplaca geral não pode haver detecção luminosa, porque a luz emitida pela reação de quimioluminescência é isotrópica, se, com uma microplaca transparente, a luz não se espalhará apenas na direção vertical, mas também na direção horizontal, faça a luz facilmente através do espaço entre o orifício e a parede do orifício, resultando na luz do valor de absorção de luz do orifício é afetado pela luz emitida pelo orifício adjacente.

Uma boa microplaca deve ter bom desempenho de adsorção, baixo valor em branco, alta transparência do fundo do orifício e desempenho semelhante entre as placas e entre os orifícios da mesma placa. Devido à diferença de matérias-primas e à diferença no processo de produção, a qualidade de vários produtos é muito diferente, portanto, o desempenho de cada lote de microplaca deve ser verificado antes do uso. Os métodos de inspeção comumente usados ​​são uma certa concentração de IgG humana (geralmente 10 ng/ml) revestida com poços de placas ELISA, após a lavagem, adicionando uma diluição apropriada de anticorpo IgG anti-humano marcado com enzima a cada poço, lavando após preservação pelo calor, adicionando cor de substrato, pare a reação enzimática e meça a absorção da solução em cada poço, respectivamente. As condições de reação foram controladas para que a leitura de cada poço fosse mantida em uma absorbância em torno de 0,8. A média das leituras totais foi calculada. A diferença entre a média de todas as leituras individuais e todas as leituras deve ser inferior a 10%. As três microplacas a seguir são A, B e C como exemplo.

Método direto: para detectar a adsorção de IgG Humana na superfície da microplaca

Método sanduíche de anticorpo duplo: antígeno em soro positivo para anticorpo anti-humano

Como pode ser visto na figura acima, nesses três tipos de placas de bioenzimas, a microplaca classe A tem um melhor efeito de adsorção de proteínas, mas também melhora a sensibilidade da adsorção de proteínas, o que pode fornecer dados experimentais mais confiáveis. Além disso, você pode perguntar sobre a placa da diferença de lote. A seguir está a diferença de lote de uma determinada placa. Como pode ser visto no gráfico de dados de diferença dentro do lote, a microplaca tem boa estabilidade entre lotes e a diferença do coeficiente de variação (CV) dentro do lote é de cerca de 5,0%, o que é significativamente menor do que o coeficiente de variação dentro do lote abaixo de 10,0% no padrão de controle de qualidade para reação imunológica clínica. Portanto, também é adequado para experimentos ELISA.