A centrífuga de congelamento de mesa de baixa velocidade é usada em laboratório para a separação primária e extração de macromoléculas biológicas, sedimentos, etc. Sua cabeça giratória é feita principalmente de liga de alumínio, que é do tipo plano e do tipo angular. O tubo centrífugo é feito de vidro rígido, plástico rígido de polietileno e tubo de aço inoxidável. A centrífuga é equipada com um motor de acionamento, um temporizador, um regulador (indicador de velocidade) e um sistema de refrigeração (faixa de temperatura ajustável é - 20~ 40 ℃), que pode substituir as cabeças rotativas com diferentes capacidades e diferentes tipos de velocidades rotacionais de acordo com às necessidades do material centrífugo.

Etapas detalhadas de centrifugação para extração de proteínas citoplasmáticas e nucleares por centrífuga de congelamento de mesa de baixa velocidade:

1. Determine o estado de crescimento celular. O estado de crescimento celular deve ser de 80% ou melhor:

2. Centrifugue a 1500r/min por 5min

3. Descarte o sobrenadante, lave as células com igual volume de PBS frio e repita 3 vezes como na etapa 2

4. De acordo com a quantidade de precipitação estimada, adicione 5 vezes o volume de sisbuffer isotônico nas partículas celulares para fazer as células suspenderem suavemente e evitar a espuma tanto quanto possível

5. Adicione o tampão de lise nas células suspensas e coloque-o no gelo por 15 minutos para permitir que as células se expandam, o que pode ser verificado ao microscópio

6. Para as células expandidas no experimento de células, adicione 10% de IGEPALCA-630 para fazer a concentração final atingir 0,3%, misture bem e adicione suavemente

7. Centrifugue imediatamente (use tubo EP de 1,5 ml a 5500 r/min por 30 segundos para grandes quantidades; use tubo de 50 ml a 5500 r/min por 2 minutos para grandes quantidades)

8. Transfira o sobrenadante (proteína citoplasmática) para um novo tubo de congelamento

9. Suspenda as células com 5 vezes o volume de partículas suspensas em tampão isotônico e misture bem

10. Centrifugue a suspensão de células a 1500r/min por 5min e remova o sobrenadante

11. Suspenda as partículas com 2/3 vezes o volume do tampão de extração

12. Coloque o tubo no misturador vibratório, agite e misture a 700r/min por 15min e depois a 1400r/min por 15min. Todo o processo deve ser cuidadoso para evitar a formação de espuma

13. Centrifugue a 9400r/min por 15min, transfira o sobrenadante para um novo tubo de centrífuga congelado após centrifugação em baixa temperatura

14. Divida em várias partes e congele-as com nitrogênio líquido e armazene-as (o armazenamento de longo prazo deve ser a - 80 ℃, o armazenamento de curto prazo deve ser de - 20 ℃)