De um modo geral, devido à composição complexa do sangue, muitas substâncias, especialmente o plasma ou soro de animais superiores, têm um forte efeito de interferência na reação entre o reagente TAL (LAL) e a endotoxina. Portanto, quando testamos a endotoxina dessas amostras, devemos remover as substâncias interferentes antes do teste.

Atualmente, as substâncias interferentes no plasma incluem principalmente vários inibidores de protease, proteínas de ligação de endotoxinas e inibidores de plasminogênio. Para colorimetria, o fator Xa pode decompor a cadeia peptídica Boc-LEU-Gly-Arg-PNA. Portanto, é necessário eliminar essas substâncias interferentes antes da determinação.

Os métodos de pré-tratamento para remover substâncias interferentes no sangue são os seguintes:

(1) Método de aquecimento por diluição: o plasma é diluído 3 a 10 vezes com água dissolvida e depois aquecido em água a 37 a 100 ℃. O tempo de espera é geralmente de 5 a 10 minutos;

(2) Método de extração de clorofórmio: adicione a mesma quantidade de clorofórmio ao plasma e vibre por 3 horas, depois pegue a camada superior para detecção;

(3) Método de tratamento com éter: adicione éter ao plasma para tratamento e remova o éter a 40 ℃;

(4) Método do ácido trifluoroacético: adicione ácido acético em um plasma para ajustar o pH 4,0 e, em seguida, use K2HPO4 para ajustar o pH para 7 ~ 7,5;

(5) Método de tratamento com surfactante: como no método de aquecimento por diluição, apenas a água de diluição é transformada em surfactante;

(6) Filtração em gel;

(7) Método de tratamento alcalino: o plasma foi mantido a 0,2NNaOH 37 ℃ por 10 minutos e depois neutralizado com HCl;

(8) Método do ácido perclórico (PCA) ou novo método do ácido perclórico (Novo PCA);

(9) Método das esferas: coloque a endotoxina absorvedora de resina especial no plasma, retire-a e adicione o reagente LAL para reação.

Entre esses métodos, os métodos comumente usados ​​são o método de extração de clorofórmio, método de aquecimento por diluição, método de ácido perclórico (PCA) e novo método de ácido perclórico (Novo PCA). Os dois primeiros métodos precisam ser discutidos durante a determinação devido à existência de taxa de recuperação de endotoxinas, falsos positivos e outros problemas. O método PCA (Novo método PCA), devido à boa taxa de recuperação da endotoxina adicionada, é atualmente usado principalmente no tratamento pré-clínico no Japão.