1. Ao determinar a endotoxina no sangue, preste atenção à seleção de métodos e reagentes.

2. Preparação de plasma ou soro

Como amostra clínica comum, o plasma é a amostra principal e sua taxa de utilização é superior a 95%. Portanto, é muito importante preparar o plasma como a parte principal do fluido corporal. Segundo Das, a endotoxina geralmente está ligada às plaquetas além de seu estado livre, por isso é mais adequado usar o plasma contendo um grande número de plaquetas como amostra. Atualmente, ao preparar plasma humano ou plasma animal, para evitar danos celulares, os países estrangeiros usam principalmente a separação a baixa temperatura, usando amostras de plasma contendo um grande número de plaquetas, ou seja, em condições de separação de 4 ℃ 1000gx10 minutos ou 3000gx40 condições de separação de segundos quando não há centrífuga de baixa temperatura. Não é permitido realizar separação de alta velocidade e longo prazo sob temperaturas normais. Além disso, ao separar plasma ou soro, deve-se evitar a contaminação bacteriana.

Preparação do soro: utilizar uma seringa sem anticoagulante para coletar o sangue e transferi-lo para um tubo de centrífuga, e colocá-lo em banho de água gelada por 30 minutos, a 4 ℃, 1000xg, 10 minutos para centrifugação.

Após a separação do plasma ou soro, se não for usado temporariamente, pode ser congelado a -80 ℃ e usado dentro de 1 mês. Observação Para evitar a adsorção de endotoxina, use um tubo de ensaio de vidro para armazenamento.

3. Tipos e efeitos dos anticoagulantes

Durante a preparação do plasma, devido à adição de certos anticoagulantes, o tipo e a quantidade de anticoagulantes têm um grande impacto na taxa de recuperação. Geralmente, os anticoagulantes comumente usados ​​incluem principalmente heparina, citrato de sódio e EDTA, entre os quais a heparina é o mais amplamente utilizado. No entanto, sabemos que uma grande quantidade de heparina irá interferir na reação da endotoxina, especialmente para o método de aquecimento de diluição e método de extração com clorofórmio, o que reduzirá a taxa de recuperação, mas terá menos impacto no método PCA, portanto, a quantidade de heparina adicionada e liberado durante a preparação do plasma só precisa de 2~5 μ L/ml é suficiente.